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引物二聚体(引物二聚体太亮怎么办)

更新时间:2026-04-08 19:07:25 点击:231

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本文目录一览:

引物二聚体

图示,最下面一排带.其电泳特征就是在100bp 以下,条带模糊一片,甚至可能为多条带,带型无绝对规律可循.

在做PCR时,出现引物二聚体

一.引物设计和样品使用均是一样的情况,就是反应条件的问题

二.反应条件就看你的实验操作和所使用的仪器,操作都一样的话,仪器设定上出问题的可能性会大一些,其中退货温度是比较关键的

三.人品问题也会导致这样的情况

四.一般减少引物二聚体的方法:

1.

从引物自身着手,重新设计引物,这是最根本解决这一问题的办法;

2.

可能模板有问题;

3.

模板浓度过小,适当加大模板量;

4.

Taq酶,引物,

Mg2

+浓度可能过高,可降低它们的浓度;

5.

取你所要加的上下游引物混合后,在100摄氏度下的沸水中煮5分钟,然后迅速拿出至于冰块之上瞬时冷却,这时再加入反应体系当中,引物二聚体就会消失的;

6.

所配MIX中加5%的甘油或者5%的DMSO,可以增强特异性;

7.

PCR反应体系的配制在冰上进行,最后加TAq酶,PCR结束后,产物勿放置在室温下过长时间,有人认为室温下有些TAQ酶会将多余的引物合成为二聚体;

8.

增加循环数;

9.

降低退火温度后有条带,则应逐渐提高温度,若提高温度的同时产物量减少,则考虑增加镁离子浓度(根据扩增片断长度而定,片段长则相应镁离子浓度应该高一些);

10.

若降低退火温度,发现还是只有引物二聚体,而且镁离子的浓度在

20-25mmol/l没有区别,则考虑Buffer等试剂没有完全融解、混匀,导致吸取的试剂浓度不对;

11.

以上次的PCR产物作模板二次PCR,可以提高引物与模板的特异性,减少引物二聚体,如果两次时间间隔短的话,可以把原产物稀释100-1000倍,如果间隔较长可以稀释50-100倍。

怎样消除引物二聚体

首先在设计引物的时候,要注意避免产生引物二聚体.现在的引物设计软件都会有一个dimer的选项,可以看出你设计的引物是否会发生二聚体.如果会形成二聚体,并且序列不能有大的变动,那就注意一下在3'端别发生dimer的互补.

其次,在PCR时提高退火温度可以提高PCR的特异性,可以减少引物二聚体.

什么是引物二聚体,它对PCR反应有什么影响?

是在pcr反应中,两条引物上的互补碱基相结合形成的聚合体,这种聚合体出现了,就相当于原本可以扩增的原料链减少了,即会导致扩增的效率降低,所以最好能避免这种物质的出现。

引物二聚体的介绍就聊到这里吧,感谢你花时间阅读本站内容,更多关于引物二聚体太亮怎么办、引物二聚体的信息别忘了在本站进行查找喔。

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